Что такое иммуногистохимия эндометрия

Самые важные вещи — это не вещи. Это здоровье, а подчас-репродуктивное здоровье. Вот уже три года я борюсь с бесплодием неясного происхождения.

Какие обследования только ни прошла наша семья: проверка проходимости маточных труб, спермограммы, бесчисленные анализы на гормоны, коагулограммы, на ЗППП и прочую нечисть.

А уж кабинет репродуктолога и УЗИ-как дом родной. Вердикт-здоровы! Но беременности нет. Остается ЭКО.

При подготовке к ЭКО особое внимание уделяется эндометрию пациентки. Ведь причины пролета в протоколе ЭКО чаще всего сводятся к двум: некачественный эмбрион и некачественный эндометрий.

Эндометрий, который не готов или нездоров, не примет оплодотворенную клетку! Что толку тогда мучить женщину дозами гормонов и бесплодными надеждами? Поэтому я была готова к тому, что мне придется пройти гистероскопию или аспират эндометрия перед ЭКО.

Я отношусь к числу женщин с «пышным», «хорошим» эндометрием по УЗИ. Никогда к нему не было вопросов. Пока несколько месяцев назад эндометрий перестал показываться в виде трех ровных полосочек и появились непонятные включения.

Предварительный диагноз перед аспиратом эндометрия был либо хронический эндометрит, либо полипоз.

Чтобы вы понимали, что такое хронический эндометрит и чем он опасен:

Хронический эндометрит — заболевание, которое характеризуется развитием воспалительного процесса в матке. Данный патологический процесс является следствием поздно выявленного и плохо пролеченного острого эндометрита, который перешел в хроническую стадию.

В случае несвоевременного лечения этого патологического процесса инфекция может распространиться на маточные трубы или в глубокие слои матки, что приводит к развитию бесплодия и сепсиса.

Иными словами, это заболевание в хронической стадии протекает практически бессимптомно, что соответственно затрудняет его диагностику, и может привести либо к бесплодию, либо к самопроизвольному прерыванию беременности на ранних сроках.

После проведенного аспирата эндометрия все «материалы» были направлены в патологоанатомическое отделение на гистологию. Гистология подтвердила признаки хронического эндометрита, и вот тогда-то для уточнения диагноза мне было предложено иммуногистохимическое исследование (ИГХ).

Что это такое?

Иммуногистохимические исследования – вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены.

При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркером.

Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.

Мне это исследование было назначено именно как УТОЧНЕНИЕ диагноза и подтверждение его природы. Допустим, гистология определяет состояние слоя матки как хронический эндометрит. Но согласитесь, неразумно лечить болезнь, не зная ее природы-бактериальной, травматической, аутоимунной и т.д.

Исследование моего материала проводилось в том же патологоанатомическом отделении. Результат обоих исследований в совокупности я получила на руки за неделю. А стоимость в моем городе Туле составила 5000. Зато я точно знаю, что со мной и как теперь с этим бороться)

Иммуногистохимия в моем случае подтвердила наличие хронического эндометрита, слава Богу, умеренно выраженного, но имеющего аутоиммунный компонент.

То есть, патологический процесс воспринимается организмом как норма и поддерживается им же!

Хронический эндометрит это клинико-морфологический синдром, при котором возникают функциональные и структурные изменения слизистой полости матки вследствие повреждения клеток эндометрия инфекционным агентом. Хронический эндометрит может протекать без отсутствия клинических признаков.

В результате воздействия патологического фактора развивается воспалительная реакция, которая является универсальным способом защиты в организм. Про хроническом эндометрите возникает воспаление в интерстициальной ткани. Оно проявляется инфильтраций макрофагами, лимфоцитами, плазматическими клетками и фиброзом ткани.

В настоящее время воспалительные заболевания органов малого таза относят к аутоиммунному процессу, который протекает как самоподдерживающаяся патологическая реакция Иммунногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения.

Вот и представьте, что меня лечили бы в слепую, или не лечили бы вообще, не согласись я на ИГХ!

По результатам иммуногистохимического исследования выдается протокол с описанием, но это уже скорее для врача).

Простому смертному это непонятно. И конечно же, стеклышки с парафином, которые надо беречь!

Мой лечащий врач успокоил меня, сказал, что в моей степени заболевания это все корректируется и расписал мне схему лечения, включающую поддержание иммунитета, физиотерапию и прочее.

Да, это нелегкий и тернистый путь к материнству. Но я справлюсь)

Вот такая информативная и порой необходимая процедура. Когда мне только предложили провести ИГХ, я тут же кинулась читать отзывы и не нашла здесь ничего.

Зато Интернет кишел «полезной» информацией об ИГХ при раке! Чего только я себе ни передумала, уж думала, что у меня подозревают страшную болезнь.

Оказалось, нет, это просто еще один достоверный способ детального изучения болезней эндометрия.

Всем девушкам, кому для подтверждения диагноза порекомендуют пройти это исследование, очень рекомендую не пожалеть денег, не плевать на свое здоровье и сделать иммуногистохимию. Врага нужно знать в лицо, а лечение должно быть грамотным — это теперь мой девиз)

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Проведению ЭКО предшествует тщательнейшая подготовка, учитываются любые нюансы, касающиеся состояния здоровья женщины, качества эмбриона. Несмотря на высокий уровень развития репродуктивной медицины и применение современных технологий, всего 30 % попыток экстракорпорального оплодотворения заканчиваются беременностью.

Если женщина несколько раз потерпела неудачу при имплантации ей эмбриона с помощью ЭКО, иммуногистохимическое исследование поможет определить причину отсутствия беременности.

Показания к исследованию

Иммунногистохимический анализ – это исследование, помогающее определить чувствительность рецепторов эндометрия к стимуляции гормонами.

Такая необходимость может возникнуть, если гормональная стимуляция не достигает своей цели из-за невосприимчивости внутренней поверхности матки к гормонам. Эта особенность репродуктивной системы женщины приводит к тому, что эндометрий развивается неправильно, не способен удержать имплантированный эмбрион.

Показания к проведению иммуногистохимического исследования:

• Несколько неудачных попыток ЭКО;
• Уточнение диагноза «бесплодие» и его причин;
• Привычное невынашивание беременности на ранних сроках;
• Уточнение диагноза «хронический эндометрит».

Кроме определения чувствительности эндометрия к эстрогену и прогестерону, ИГХ определяет наличие клеток, препятствующих беременности. По результатам исследования могут быть обнаружены следующие патологии:

• Хронический эндометрит;
• Гиперплазия;
• Заражение вирусом папилломы человека (ВПЧ 16);
• Нарушение дифференциации клеток эндометрия;
• Неполное функционирование секреторного аппарата.

Потенциальная способность матки удерживать плодное яйцо может быть нарушена из-за воспалительных процессов в ее внутренней оболочке, которые невозможно диагностировать другими способами.

Проведение исследования эндометрия поможет своевременно диагностировать и устранить препятствия к имплантации эмбриона.

Как проводится диагностическое исследование

Материалом для иммуногистохимического исследования является биоптат слизистой оболочки матки. Его получают при помощи пайпеля – аспирационной кюретки.

Забор материала проходит безболезненно, предварительная анестезия обычно не требуется. Срок проведения анализа определяется лечащим врачом и зависит от цели исследования. Врач выбирает фазу и день менструального цикла:

18-22 день.

Диагностирование нарушения имплантации плодного яйца.

9-10 день.

Диагностирование воспалительного процесса в полости матки.

Эти сроки актуальны для 28-дневного цикла. Если менструальный цикл короче или длиннее стандартного, сроки исследования определяются врачом индивидуально для каждой пациентки.

После забора материала его отправляют в специализированную лабораторию. Исследование проводится как при наличии овуляции, так и при ее отсутствии при заместительной гормональной терапии.

Какие результаты показывает иммуногистохимия

По результатам исследования врач определяет временной промежуток имплантационного окна – определенный период наибольшего соответствия эндометрия и эмбриона.

Именно в этот период иммуногистохимия эпителия эндометрия диагностирует наличие пиноподий – специфических выпячиваний на его поверхности.

Обычно имплантационное окно фиксируется с 20 по 24 день менструального цикла. В этот срок требуется наибольшее соответствие функционального соответствия и степени развития эмбриона и эндометрия.

Изучение морфологии слизистой матки позволяет диагностировать:

• Наличие воспалительных изменений – диффузных и очаговых инфильтратов лимфоидных клеток, плазматических клеток в строме;
• Наличие склеротических изменений в стенках артерий;
• Полипы эндометрия;
• Гиперплазию;
• Наличие или отсутствие пиноподий;
• Форму и строение рецепторов к прогестерону и эстрогену, их коэффициент и чувствительность к гормонам;
• Экспрессию иммунногистохимических маркеров – белков, регулирующих клеточный цикл (Ki67, циклин E, P27 и других).

При подготовке к ЭКО исследование помогает определить чувствительность слизистой оболочки матки к гормонам. Это очень важно при реализации репродуктивной программы.

Врач использует результаты иммуногистохимии для определения возможного сдвига имплантационного окна, определения состояния эндометрия в определенный период цикла.

Данные анализа биоптата слизистой совершенно точно укажут на наличие или отсутствие воспалительного процесса в полости матки, как возможного препятствия для имплантации бластоцисты.

Для чего и когда проводится ИГХ-исследование? Стоимость диагностики

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы – один из базовых анализов, применяемых в онкологии.

В чем суть этого исследования, когда и как оно применяется, какие противопоказания имеет, каков прогноз заболевания, — эти вопросы являются наиболее актуальными для пациентов, страдающих от подобных заболеваний.

Когда требуется ИГХ, показания

• Для того чтобы ответить на вопрос о показаниях, и выяснить, для чего нужно ИГХ исследование, сначала необходимо уяснить, что же это такое.
• Все наверняка помнят со школьных лет опыт, когда капля настойки йода с абсолютной точностью выявляла в образце крахмал.
• Йод вступал с крахмалом в реакцию, результатом которой было образование пятна характерного темно-фиолетового цвета.
• Тот же принцип положен и в основу ИГХ, с той только разницей, что реакция вещество-антитело не имеет видимых цветовых эффектов.

Иммуногистохимическое исследование – это воздействие на образцы тканей с целью выявления определенных веществ.

Воздействие производится реактивами, содержащими антитела к искомому веществу. Антитело вступает в реакцию с объектом исследования, обозначая его присутствие.

Но ученные нашли выход: антитела подкрашиваются искусственно. Вступившие в реакцию вещества образуют с искомым элементов связи, наглядно обозначая присутствие последнего.

Гистохимический метод исследования позволяет с высокой точностью выявлять вещества, сопровождающие образование злокачественных изменений в организме – раковых клеток и метастазов.

Благодаря этому тесту можно определиться с дальнейшим прогнозом. Таким образом, основное показание к ИГХ исследованию – подозрение у пациента онкологических заболеваний, конкретно, РМЖ.

Возможности гистологического исследования ИГХ:

• определение типа (злокачественное/доброкачественное) образований;
• прогноз возможного развития опухолевого заболевания;
• выявление метастазирования карциномы;
• определение эффективности различных способов лечения;

Кроме того, ИГХ метод имеет широкое распространение в других областях медицины, в частности, в гинекологии, где большое распространение получило иммуногистохимическое исследование эндометрия.

ИГХ позволяет выявлять рак на самых ранних (клеточных) стадиях, что, безусловно, имеет решающее значение для успешного лечения болезни и прогноза.

Что показывает ИГХ?

Выявляемые в ходе иммуногистохимического исследования вещества являются маркерами различных происходящих в организме пациента процессов.

Расшифровка и интерпретация ключевых параметров, исследуемых с помощью гистохимии, поможет более подробно разобраться в вопросе.

HER2

1. Анализ на HER2 – стандартная процедура при подозрении онкологии молочной железы.
2. Он позволяет выявить вещества, свидетельствующие о наличии популяции пролиферирующих (бесконтрольно делящихся), что и характеризует опухолевые заболевания.
3. Объектом ИГХ исследования на HER2 является микроскопический образец ткани молочной железы.

Расшифровка аббревиатуры HER2 – human epidermal growth factor receptor 2 – рецептор фактора эпидеомального роста у человека. В норме он отвечает за деление и рост клеток.

Наличие повышенного числа рецепторов роста как раз и свидетельствует о неконтролируемом, избыточном росте и делении клеток ткани.

FISH

• Анализ ФИШ при раке молочной железы или FISH-исследование – дорогостоящий, но более точный метод, способный однозначно выявить амплификацию (аномальное увеличение) фактора HER2.
• При анализе FISH также используются подкрашенные маркеры, однако в данном случае они вступают в реакцию с отдельными участками хромосомы, что позволяет получать гораздо более точный результат.
• При исследовании возможны только два показателя индекса:
• HER2-негативный рак молочной железы — Амплификация отсутствует, соответствует показателю 0 при исследовании HER2.
• HER2-позитивный рак молочной железы — Амплификация присутствует, соответствует показателю 3+ при анализе HER2.
• Обследование FISH не оставляет недомолвок, результат индекса трактуется однозначно.

KI-67

1. KI-67 при раке молочной железы (КИ 67) является маркером пролиферации (пролиферативная активность – показатель интенсивности деления клеток).
2. Анализ на KI-67 маркер проводится при выявлении злокачественной опухоли и ставит своей целью определение эффективности химиотерапевтических методов лечения.
3. Результат анализа обозначается в процентах (KI-67 n%) и интерпретируется следующим образом:
4. КИ 67 < 30% — Химиотерапия неэффективна, показана гормональная терапия
5. КИ 67 30-50% — Применима химиотерапия в сочетании с другими методами лечения
6. КИ 67 > 50% — Химиотерапия эффективна
7. В дополнение к анализу на индекс КИ 67 нередко назначают иммуногистохимию при раке молочной железы на белок P53.

Химиотерапия – очень агрессивный метод, врачи обычно стараются заменять его более щадящими способами лечения.

Анализ на маркер пролиферативной активности по KI-67 позволяет применять химиотерапию только при максимальной ее эффективности.

Белок P53

В организме белок P53 играет роль регулятора клеточного цикла. Данный элемент является маркером злокачественности опухоли – то есть, способности опухолевых клеток образовывать метастазы.

Чем ВЫШЕ белок P53 – тем НИЖЕ способность клеток опухоли к метастазированию, и наоборот.

ER/PR

Еще одно распространенное иммуногистохимическое исследование при раке грудной железы. ER и PR – это рецепторы к эстрогенам и прогестерону соответственно.

Наличие этих рецепторов в образце служи маркером того, что опухоль развивается под воздействием гормонов. Следовательно, необходимо лечение методами гормональной терапии.

• Результат анализа ER/PR обозначается в баллах от 0 до 10. Чем выше показатель, тем выше чувствительность к гормональной терапии:
• ER/PR

Иммуногистохимия эндометрия: цели проведения и информативность исследования, характер процедуры

Бесплодие – проблема, которая коснулась многих пар, при этом, в последние годы статистика говорит о том, что число женщин, страдающих бесплодием, неуклонно растет. Часто такое явление связано с патологиями в эндометрии, которые возможно устранить для наступления беременности.

Однако вероятность успешного лечения тем выше, чем раньше была установлена его причина и начато лечение.

В целях установки причин используется множество методов, в том числе, иммуногистохимия эндометрия – специфический и довольно сложный анализ, который проводится только при назначении лечащим врачом.

Определение

Иммуногистохимический анализ – уникальное и сложное исследование эндометрия, который помогает провести его комплексное изучение и диагностировать несколько патологий.

Как ясно из названия, ИГХ совмещает в себе черты гистологического исследования (то есть изучения клеточного состава тканей) и иммунологического (то есть, на наличие специфических иммунных клеток и антител к тем или иным возбудителям).

В ходе исследования можно установить факт наличия специфических клеток, которые препятствуют наступлению беременности, а также их количество.

Кроме того, такой анализ помогает оценить чувствительность рецепторов эндометрия к естественной гормональной стимуляции в период овуляции или при проведении стимулирующей активной гормонотерапии в период подготовки к экстракорпоральному оплодотворению.

Это делается потому, что нередко формируется следующая ситуация: женщина здорова, гормональный уровень в норме, эндометрий в норме, антиспермальные антитела отсутствуют, однако беременность не наступает.

Такое явление развивается потому, что эндометрий не воспринимает гормонального воздействия, не утолщается, не обновляется и т. д.

Такое состояние можно лечить, однако более успешно это происходит в случае, когда оно своевременно диагностировано. Именно для этого и нужна ИГХ.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Без каких-либо сомнений можно сказать, что бесплодие является огромной проблемой, которая застала врасплох многие молодые пары.

Судя по ежегодной статистике, в последнее время очень быстро увеличивается количество женщин, страдающих этим заболеванием.

Не редко подобное явление возникает из-за патологий в эндометрии, которые, к слову, можно было устранить еще до наступления беременности.

Тем не менее, шанс полного выздоровления напрямую зависит от того, когда была выявлена проблема и когда занялись её лечением. Для определения возможных причин может использоваться немалое количество методов, одним из которых является иммуногистохимия эндометрия. Это достаточно сложный и в свою очередь специфический спектр анализов, который назначается исключительно лечащим врачом.

Что это такое?

Иммуногистохимия эндометрия – особенное и достаточно трудное в реализации исследование эндометрия. Этот анализ позволяет провести обширное изучение и диагностику слизистой оболочки матки.

Если судить по названию, то стаёт понятным то, что ИГХ включает в себя, как гистологические исследования, так и иммунологические. Первые отвечают за изучение состава тканей, а вторые – за поиск возбудителей и антител.

В процессе исследования можно будет установить факт присутствия клеток, которые не позволяют женщине забеременеть. В ходе этой процедуры также будет определено и их количество.

С помощью такого анализа можно будет оценить насколько чувствительны рецепторы эндометрия к природной гормональной стимуляции в период, когда проходит овуляция, а также во время проведения активной гормонотерапии перед экстракорпоральным оплодотворением.

Это делается в связи с тем, что достаточно часто возникает следующая проблема: здоровье женщины в норме, гормональный уровень и эндометрий так же, не найдены антиспермальные антитела, но, несмотря на это, она не может забеременеть.

Главной причиной подобного явления является такой факт: эндометрий отказывается воспринимать гормональное воздействие, в связи с чем не обновляется и не утолщается.

Что выявляет и когда назначается

Как уже было сказано выше, предназначением ИГХ является диагностика бесплодия. Таким образом, рассмотрим наиболее частые случаи назначения иммуногистохимического анализа:

1. Экстракорпоральное оплодотворение выявилось безуспешными;
2. У пациентки постоянно случаются выкидыши на ранних сроках беременности;
3. У женщины наблюдаются симптомы бесплодия, но диагноз еще не подтвержден;
4. Поставлен диагноз бесплодие.

Кроме того, как показывает опыт, при подобном исследовании кроме причины бесплодия, может быть выявлена и эндометрия иного типа. В связи с этим, ИГХ часто назначается в таком случае, когда нужно провести диагностику хронического вялотекущего эндометрита, определить который другими методами не удаётся. Также в процессе исследования могут быть поставлены и следующие диагнозы:

• Неполная трансформация эндометрия;
• Эндометрит;
• Нарушение и десинхронизация фаз его развития;
• Гиперплазия.

Приблизительно в 70-75% случаев именно одна из выше наведенных причин приводит к бесплодию. Стоит отметить, что все эти болезни достаточно легко поддаются лечению, если были выявлены на ранних этапах.

ИГХ в основном исследует биоптат слизистой матки. Получают этот материал с помощью специальной аспирационной кюретки — пайпеля. Процесс является безболезненным и не требует использования анестезии.

По завершению исследования врач рассчитывает срок имплантационного окна – определенный промежуток времени, при котором наблюдается наибольшее соответствие эндометрия и эмбриона. На протяжении этого срока проверяется наличие пиноподий. В норме имплантационное окно начинают фиксировать с 20 по 24 день менструального цикла.

Противопоказания

Иммуногистохимическое исследование эндометрия не имеет особых противопоказаний. Единственным случаем, когда невозможно сделать данный анализ, является невозможность забора образцов тканей, нужных для исследования. Тем не менее, стоит отметить и показания для проведения этой процедуры:

1. Неоднократные провальные попытки ЭКО;
2. Невынашивание беременности на ранних сроках;
3. Подозрение на злокачественное новообразование;
4. Исследование бесплодия и выявление его причин.

Стоит отметить, что с помощью ИГХ можно исследовать практически любые ткани. Среди выше наведенных показаний самым главным является подозрение на злокачественное новообразование.

Правильная подготовка

Поскольку забор нужного для исследования материала выполняется методом обычного выскабливания, то нужно понимать, что его требуется проводить только в период, когда эндометрий готов к этому. Из-за этого врач вынужден назначить сдачу анализов на определенный день.

Данную процедуру строго не рекомендуется проводить в любой другой день. В большинстве случаев материал можно забирать на 5-7 сутки цикла для проведения диагностики воспалительных процессов, а также разрастаний.

Если требуется оценка рецепторной функции, то проводят процедуру на 20-24 день.

Кроме того, существует небольшой перечень правил, которых нужно придерживаться:

1. Не принимать гормональные препараты на протяжении недели перед исследованием;
2. Не принимать кроворазжижающие средства, чтобы избежать кровотечения после процедуры биопсии;
3. Соблюдать все правила гигиены в день, когда будет проводится ИГХ.

Ход процедуры

Иммуногистохимический анализ эндометрия проводится следующим образом:

1. Вводится обезболивающее;
2. Установка специальных расширителей;
3. Профилактические меры;
4. Введение гистероскопа;
5. Процедура выскабливания;
6. Извлечение препарата;
7. Прижигание поврежденных сосудов;
8. Извлечение оборудования;
9. Повторное сканирование каждого из органов;
10. Снятие расширителей.

После выполнения всех этих процедур пациентку переводят в отдельную палату, где она будет находится до того момента, пока не отойдет от анестезии. После этого она уже может покинуть больницу. Результаты можно будет получить уже через несколько дней.

Расшифровка

Расшифровка выполняется только врачом в связи с тем, что не существует общей для всех нормы. Она в основном зависит от физиологического возраста женщины, её гормонального фона и прочих факторов. Более простой является ситуация с эндометритом.

Специалист использует полученные результаты анализов с целью определения сдвига имплантационного окна. Кроме того, проверяется состояние эндометрия в определенный момент цикла. Результаты анализов биоптата смогут с 100% точностью указать на то, есть ли у пациентки воспалительный процесс в полости матки.

Сколько стоит

К сожалению, исследование требует достаточно больших капиталовложений. Цена на иммуногистохимию эндометрия варьируется от 2000 рублей (Екатеринбург) до 7500 рублей (Москва). Чаще всего пациентки покупают абонемент на проведение ИГХ в следующих медучреждениях:

• Мед. Лаборатория «KDL»;
• Университетская Клиника;
• Мед. Центр «Шанс».

Отзывы

Отзывы пациентов об процедуре ИГХ достаточно положительные. В большинстве случаев женщины рады качеством медицинского обслуживания.

Тем не менее, существуют и те, кто считают данную процедуру абсолютно бесполезной. Обосновывают они свою позицию тем, что далеко не все врачи хорошо в этом разбираются.

Также пациентки ссылаются на болезненность процедуры, но также отмечают и то, что процедура очень быстрая.

Анастасия:

Я очень долго не могла забеременеть, врачам также не удавалось установить правильный диагноз. Решила провести этот анализ, и врачи по результатам нашли патологию. Сама процедура немного болезненная, но терпимо. Теперь прохожу курс лечения.

Людмила:

После 2 выкидышей решила обратиться к врачу за консультацией, он посоветовал сделать ИГХ. В итоге я решилась и сделала его. Удивило то, что процедура очень быстрая и результативная хоть и болезненная.

Иммуногистохимический анализ эндометрия

Уникальные диагностические исследования для женщин в Клинике Молодости и Красоты СЛ:

• комплексное морфометрическое исследование эндометрия
• морфометрическое исследование площади поверхности эпителия с пиноподиями
• морфометрическое исследование рецептивности эндометрия к половым гормонам методом Hitscore
• ИГХ до 5 антител и более 5 антител

ИГХ — иммуногистохимический анализ эндометрия. Это анализ, который может быть назначен лечащим гинекологом в случае, если:

• поставлен диагноз или подозрение на «бесплодие»
• происходит невынашивание беременности (ранняя потеря беременности)
• несколько попыток ЭКО оказались неудачными
• необходима диагностика хронического эндометрита

ИГХ – анализ, который помогает определить наличие и количество клеток, препятствующих возникновению беременности. А также определяет чувствительность рецепторов эндометрия к гормональной стимуляции, т.к.

может сложиться ситуация, что женщина в целом здорова и все показатели в норме, однако, эндометрий не воспринимает гормоны, что не позволяет ему развиваться правильно.

В этом случае, могут быть обнаружены такие патологические изменения эндометрия, как:

• гиперплазия
• эндометрит
• десинхронизация процессов дифференцировки эндометрия
• неполноценная секреторная трансформация

Зачастую (в 2 из 3 случаях не возникновения желанной беременности) именно эти патологии становятся главными причинами, поэтому так важно вовремя обратиться к опытному специалисту и провести ИГХ.

После назначения анализа доктором, производится биопсия (забор) эндометрия (пайпель-биопсия, гистероскопия с биопсией) — для диагностики эндометрита на 5-7й день цикла.

Для оценки секреторной трансформации (рецептивность эндометрия, оценка пиноподий) на 20-24й день цикла при 28-дневном цикле.

В любом случае, день и способ забора материала определяются на консультации со своим лечащим врачом в Клинике.

С помощью иммуногистохимического исследования эндометрия можно выявить инфицирование вирусами (ВПЧ 16, ВПГ и др.), чему в последнее время уделяется большое внимание, как причине хронического эндометрита и, как следствие, бесплодности женщины.

Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное

Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное

Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) — расширенное – комплекс исследований биоптата слизистой оболочки матки, включающий морфологическое исследование с использованием стандартных методик окраски, а также определение наличия в эндометрии некоторых необходимых для успешной имплантации эмбриона молекул и маркеров иммунокомпетентных клеток, присутствие которых свидетельствует о хроническом воспалительном процессе.

Эндометрий – это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности.

Ведущее значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия – способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки.

На рецептивность оказывают влияние изменения эндометрия на тканевом, клеточном и молекулярном уровне.

Соответственно стадиям менструального цикла, эндометрий претерпевает ряд структурных изменений, которые посредством гормональной регуляции синхронизированы с процессами созревания яйцеклетки.

Так, к началу лютеиновой фазы, наступающей после овуляции (высвобождения зрелой яйцеклетки), ткань эндометрия значительно утолщается, становится более богатой железами и обильнее кровоснабжается.

С процессами, происходящими в эндометрии, связано второе название этой фазы цикла – секреторная.

Структурная перестройка эндометрия контролируется стероидными гормонами яичников — эстрогеном и прогестероном, — влияние которых опосредуется через соответствующие рецепторы, располагающиеся внутри клеток эндометрия. Достаточный уровень рецепторов каждого гормона необходим для подготовки эндометрия к имплантации эмбриона.

Период, когда эндометрий максимально восприимчив к имплантации оплодотворенной яйцеклетки, называется имплантационным окном. Наиболее часто имплантационное окно наступает с 5-го по 10-й дни после овуляции (соответственно, 20-24-й дни 28-дневного менструального цикла), а его продолжительность составляет не более 48 часов.

При овариальной стимуляции в рамках процедур вспомогательных репродуктивных технологий данные временные интервалы сдвигаются.

В период имплантационного окна взаимодействие эндометрия и эмбриона приводит к имплантации оплодотворенной яйцеклетки и наступлению беременности, в любое другое время эндометрий является нерецептивным и успешная имплантация эмбриона в него невозможна.

Наступление окна имплантации сопровождается изменениями наружного слоя эндометрия – покровного эпителия, в котором образуются мельчайшие выпячивания (пиноподии). Их образование соответствует периоду максимальной рецептивной активности эндометрия. Именно на поверхности пиноподий происходят начальные этапы присоединения оплодотворенной яйцеклетки к эндометрию.

Для данного процесса исключительное значение имеет вырабатываемый пиноподиями цитокин – LIF (Leukemia inhibitory factor, ингибирующий лейкемию фактор), продукция которого достигает пика именно в период окна имплантации, что позволяет отнести его к молекулярным маркерам рецептивности эндометрия.

Эмбрион представляет на своих клетках рецепторы к LIF и присоединяется к участкам эндометрия с большим количеством пиноподий.

Нарушение рецептивности эндометрия в период окна имплантации, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой являются причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, около 65% неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия. Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту. Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов.

Однако при адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности. В связи с этим диагностика рецептивного статуса эндометрия и причин его нарушения занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий.

На первом этапе исследования биоптата в обязательном порядке проводится гистологическое исследование, которое позволяет оценить состояние клеточных структур, желез и сосудов эндометрия, а также наличие признаков воспалительных изменений.

Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток.

В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что требует проведения дополнительных методов диагностики.

В состав данного комплекса входит иммуногистохимическое исследование, которое включает в себя определение на клетках эндометрия следующих маркеров:

• ER и PR – рецепторы к эстрогену и прогестерону;
• LIF – ингибирующий лейкемию фактор;
• CD56 – маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров;
• CD138 — маркер плазматических клеток.

Биологический материал для данного исследования целесообразно получать посредством пайпель-биопсии эндометрия или соскоба из полости матки. После взятия биоптата его помещают в ёмкость с фиксирующим раствором на 24-48 часов. По окончании фиксации биоптат декальцинируют, обезвоживают и пропитывают парафином – получаются готовые парафиновые блоки.

Для гистологического исследования из парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями. Затем для проведения иммуногистохимического исследования срезы окрашивают растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров.

Если в клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце.

Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежит в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики причин бесплодия и невынашивания беременности, а также неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения и других вспомогательных репродуктивных технологий.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях дисфункции эндометрия – невынашивании беременности, бесплодии, неудачных попытках ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе.

Что означают результаты?

Результат гистологического исследования включает в себя макроскопическое описание биоптата (размеры, цвет), описание желез, стромального и сосудистого компонента эндометрия с наличием или отсутствием признаков воспалительных изменений. В заключении указывается соответствие строения эндометрия фазе менструального цикла.

Результаты иммуногистохимического определения экспрессии ER и PR оцениваются по системе Histochemical Score.

В данной системе учитывается не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окраски. Максимальное значение по этой шкале соответствует 300 баллам.

Полученное количество баллов, характеризующих экспрессию ER и PR, расценивают следующим образом:

• 0-10 баллов – отсутствие экспрессии;
• 11-100 баллов – слабая экспрессия;
• 101-200 баллов – умеренная экспрессия;
• 201-300 баллов – выраженная экспрессия.

Экспрессия LIF оценивается полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике:

• 0 баллов – (–) отсутствие окрашенных клеток;
• 0,5 балла – (±) менее 5% окрашенных клеток;
• 2 балла – (+) менее 20% окрашенных клеток;
• 4 балла – (++) от 20 до 40% окрашенных клеток;
• 6 баллов – (+++) более 40% окрашенных клеток.

Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток CD138 и CD56 оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:

• для CD138: 0 клеток – норма, единичные клетки – слабо выраженный, 2-3 – умеренно выраженный, более 5 – выраженный;
• для CD56: до 10 клеток – норма, повышены в два раза – слабо выраженный, повышены в три раза – умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз – выраженный.

Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом. Клиническая интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.

Что может влиять на результат?

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

Важные замечания

• Объем полученного при биопсии материала должен быть не менее одного кубического сантиметра. Это важно не только для адекватного гистологического исследования, но и для возможности проведения необходимого количества иммуногистохимических реакций.
• Противопоказанием к любому виду биопсии эндометрия являются беременность и острые инфекционно-воспалительные заболевания органов мочеполовой системы.

Также рекомендуется

• Планирование беременности – здоровье партнеров (для женщин)
• Планирование беременности — здоровье партнеров (для мужчин)
• Планирование беременности — гормональные анализы
• Обследование женщин при планировании ЭКО (2-5 день цикла)
• Гормональные анализы при планировании ЭКО (20-23 день цикла)
• Обследование мужчин при планировании ЭКО
• Панель «Ответ на стимуляцию яичников при ЭКО» – 4 маркера

Иммуногистохимическое исследование эндометрия как метод мониторинга в программах подготовки эндометрия у женщин с неудачами вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе

Проблема бесплодия имеет медицинское, социально-демографическое и экономическое значение в большинстве развитых стран мира. Ежегодно в мире регистрируется 2–2,5 млн. новых случаев мужского и женского бесплодия.

Изучение факторов бесплодия в браке различными авторами показало, что почти у каждой второй семейной пары (44,3–52,7 %) бесплодие обусловлено заболеваниями органов репродуктивной системы женщины, у 6,4–19,4 % семей — в результате патологии репродуктивной функции мужчины, а более трети семье (34,2–38,7 %) имеют бесплодие, обусловленное патологией репродуктивной функции обоих супругов.

Для преодоления бесплодия в рамках вспомогательных репродуктивных технологий используется экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) преовуляторных ооцитов и переноса дробящихся эмбрионов в полость матки пациентки.

Однако реальная эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) не превышает 30–40 %.Пациентки с многократными неудачными программами вспомогательных репродуктивных технологий составляют около 30 % от всех пациентов, которые лечатся с использованием этих методов.

Это связано с большим разнообразием факторов, влияющих на результат имплантации после пересадки эмбриона. Все факторы, связанные с неудачами имплантации можно разделить на две группы: качество эмбриона и состояние эндометрия. По данным H. Achache в 2/3 случаев неудачи ЭКО связаны с нарушением рецептивности эндометрия и имплантации.

Неадекватная рецептивность эндометрия ответственна приблизительно за две трети неудач имплантации, тогда как эмбрион — только за одну треть.

Роль патологии эндометрия в патогенезе бесплодия несомненна. Ведь именно адекватное морфофункциональное состояние эндометрия является одним из основных факторов, обеспечивающих успешную имплантацию оплодотворенной яйцеклетки и развитие эмбриона.

«Золотым стандартом» и окончательным этапом диагностики состояния эндометрия является морфологическое исследование эндометрия.

Однако, рандомизированные контролируемые исследования показали еще несколько лет назад, что гистологическое исследование эндометрия не является достоверным методом для оценки недостаточности лютеиновой фазы и вообще для того чтобы каким-либо образом влиять на выбор тактики лечения бесплодия и не должно использоваться в качестве рутинного метода диагностики бесплодия. Поэтому в настоящее время усилия направлены на разработку иных методов методов исследование эндометрия, в частности экспрессии ряда генов в эндометрии в период «окна имплантации», т.н. оценку «рецептивности эндометрия».

Исходя из вышеперечисленного, целью нашей работы явилось использование иммуногистохимического метода оценки рецепторного аппарата эндометрия в процессе подготовки разнородной когорты пациенток после неудач программ ВРТ.

Материалы и методы обследования

Обследованы 82 женщины с бесплодием, вступающие в программу ВРТ с неудачами ЭКО в анамнезе.

Критериями включения в основную группу (ОГ) было отсутствие беременности после программ ВРТ при удовлетворительном качестве перенесенных эмбрионов. Пациентки ОГ были разделены на две подгруппы: ОГ-1 и ОГ-2.

В ОГ-1 вошли пациентки с трубноперитонеальной формой бесплодия; в ОГ-2 — пациентки, которые являлись носителями полиморфизма генов тромбофилий.

Контрольную группу (КГ) составили женщины (41 чел.), планирующие наступление беременности (в период предгравидарной подготовки), не использующиеся ВМС и гормональной контрацепцией, и имеющие отклонения в состоянии эндометрия по результатам ультразвукового обследования.

У пациенток ОГ и ГС исследовались биоптаты функционального слоя эндометрия, взятые на 20–24 день овуляторного менструального цикла, в период «окна» имплантации.

В дальнейшем проводилось патоморфологическое исследование биоптата, а также выполнялось иммуногистохимическое (ИГХ) исследование маркеров рецептивности стромы и желез эндометрия Ki 67, PCNA, полуколичественное определение рецепторов к эстрогену и прогестерону.

После оценки инфекционного статуса пациенток, морфологического и иммуногистохимического исследования, в зависимости от полученных результатов была проведена комплексная терапия.

Вкомплекс проводимых мероприятий для ОГ-1 была включена этиотропная антибактериальная, противовирусная терапия, коррекция гормональных нарушений (норгестрел + эстрадиола валерриат); для группы ОГ-2-профилактическое назначение антитромботических средств (дипиридамол, надропарин кальция).

Кроме того, все пациенткам ОГ были назначены в зависимости от иммунного статуса иммуномодуляторы (тилорона дегидрохлорид, азоксимера бромид, интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2), витаминные комплексы, метаболические препараты (пентоксифиллин, дипиридамол, сухой водный экстракт свежих листьев артишока полевого) физиолечение (на аппарате «Андрогин») а также пробиотики. Контроль эффективности терапевтических мероприятий проводился через 6 месяца у пациенток ОГ.

Статистическая обработка данных выполнена с применением прикладных программ для статистической обработки «Excel 7.0», раздел «Анализ данных», подразделение «Описательная статистика» и «Statistika 6.0».

Для оценки динамики среди параметрических зависимых данных использовался попарный критерий Стьюдента.

Для анализа качественных независимых использовали критерий Пирсона (х2), либо точный критерий Фишера

Результаты исследования и обсуждения

Пациентки ОГ и ГС были сопоставимы по возрастному критерию (до 35 лет). Средний возраст пациенток в ОГ-1 составил 34,3±2,56 года; в ОГ-2–32,4±2,39 года; в КГ — 31,04±2,36 (р>0,05).

При исследовании гормонального профиля у пациенток ОГ и ГС средние показатели эстрадиола и прогестерона в группах не имели достоверных различий и находились в пределах референсных значений данного репродуктивного возраста.

Морфологическое исследование эндометрия выявило патологические изменения у всех пациенток ОГ-1.

Наиболее часто она была представлена хроническим эндометритом (инфильтраты лимфоидных клеток, плазматические клетки, склеротические изменения стенок спиральных артерий) — 19 (23,17 %) пациенток в группе ОГ-1, что совпадает с данными ряда исследователей.

В группе ОГ-2 у 5и пациенток отмечены склеротические изменения стенок спиральных артерий при отсутствии воспалительных изменений. В этой же группе выявлено достоверно большее количество пациентов с НЛФ — 10 (24,39 %) чем в ОГ-1 .